Головна |
«« | ЗМІСТ | »» |
---|
Полімеризація дочірньої ДНК на матриці ДНК призводить до її подвоєння або реплікації. Для реалізації механізму реплікації необхідна матриця - розплетена ланцюг ДНК, субстрати, які беруть участь в полімеризації ДНК, ферменти, що каталізують цей процес, іони Mg2*, А також білкові чинники, що забезпечують деспіралізаціі двухнитевой ДНК. У прокаріотів ДНК має форму кільця, причому в певному ori-сайті (origin - початок реплікації) ланцюга розходяться і утворюються дві реплікативних вилки, що рухаються в протилежних напрямках. У еукаріот є велика кількість оп-сайтів, і реплікація проходить одночасно на багатьох ділянках ДНК. У точках початку реплікації відзначено велику кількість А = Т пар основ, з'єднаних лише двома водневими зв'язками, що сприяє більш легкому розриву і розбіжності ланцюгів.
Реплікація завжди передує поділу клітини і починається з розплітання подвійної спіралі ДНК. Це здійснюється за допомогою ферментів Хе ліказ, які переміщаються уздовж ланцюгів ДНК і розкручують їх. Процес розплітання спіралей ДНК є енергозалежною і вимагає витрати АТФ. Інтенсивне розкручування ДНК може привести до утворення додаткових витків. Це явище носить назву позитивної сверхспіра- лизации або сверхскрученності і усувається за допомогою ферментів топоізо- Мераз. Зокрема, топоізомераза II здійснює релаксацію позитивної свсрхспіралізаціі за рахунок утворення негативних сверхвітков. Топоізомераза II також носить назву гіраза. Після розплітання двох ниток ДНК необхідно їх стабілізувати в цьому стані. Виявилося, що існує спеціальний білок, специфічно зв'язується з однією з ниток ДНК і перешкоджає зворотному рекомбінації в подвійну спіраль. Його називають білком SSB (single strand binding). Таким чином, розплітання ДНК і утворення реплікативних вилок є достатньою підставою (за наявності ферментів і субстратів реплікації) для подвоєння ДНК.
Білки, залучені в процеси реплікації, представлені в табл. 28.1.
білок |
Основні функції |
ДНК-полімерази |
полімеризація дезоксирибонуклеотидов |
Хслікази |
Розкручування ланцюгів ДНК |
Тойонзомерази |
Релаксація позитивної свсрхспіралізаііі |
прайму за |
Синтез РНК-праймера |
білок SSB |
Перешкоджає зворотного рекомбінації розплетених ланцюгів в подвійну спіраль |
ДНК-лігаеи |
З'єднують фрагменти Окадзакі на відстає ланцюга |
Безпосередньо синтез нового ланцюга ДНК здійснюється за допомогою ДНК-полімерази. У прокариот знайдено три типи цих ферментів, а саме: ДНК-полімераза I, ДНК-полімераза II і ДНК-полімераза III. ДНК-полімераза I - протомеров з молекулярної масою близько 100 kDa. Фермент поліфунк- ціонален; він володіє полімеразної і нуклеазного активністю. Бере участь в процесах репарації ДНК. Роль ДНК-полімерази II поки не зовсім ясна, відомо, однак, що мутації генів, її кодують, не позначаються на життєздатності клітин. З цих ферментів ДНК-полімераза III виявилася найбільш функціонально значущою; саме цей фермент каталізує нарощування підлогу і нуклеотидної ланцюга ДНК. Він є олігомером і складається з семи нерівнозначних субодиниць, одна з яких має найбільшу полімеразної активністю. Виявилося, однак, що ДНК-полімераза III не може самостійно приєднуватися до ланцюга ДНК і ініціювати утворення нового ланцюга, тому синтез повинен бути ініційований якийсь інший структурою. Такою структурою є фрагмент РНК, який синтезується в сайті ініціації і до якого приєднується ДНК-полімераза. Цей фрагмент називається праймером, а РНК-полімераза, що каталізує його освіту, - праймазой.
У еукаріот знайдено п'ять типів ДНК-полімерази: а, е, р, у і 5. Основним ферментом синтезу ДНК у еукаріот є ДНК-полімераза 8. Функції ДНК-полімерази (3 подібними до таких для ДНК-полімерази I прокаріотів. Що стосується ДНК-полімерази у , вона каталізує процеси полімеризації нуклеотидів в мітохондріях (табл. 28.2).
ДНК-полімерази еукаріот менш активні в порівнянні з прокариотичними ферментами. ДНК-полімераза а нарощує в секунду близько 100 нуклеотидів, що майже в 10 разів менше, ніж ДНК-полімераза III у прокаріот.
Таблиця 28.2. Порівняльна характеристика ДНК-полімерази у прокаріотів і еукаріотів
Е. СОН |
тварини клітини |
функції |
1 |
а |
Ідентифікація та заповнення прогалин на відстає ланцюга ДНК. деградація праймерів |
II |
е |
Контроль правильного чергування дезоксирибонуклеотидов в ново синтезованої ланцюга ДНК. репарація ДНК |
Р |
репарація ДНК |
|
У |
Синтез мітохондріальної ДНК |
|
III |
S |
Синтез ланцюгів ДНК |